摘要】目的 建立明胶空心胶囊中铬检测的快速前处理方法，适应医院药房对胶囊剂的检验。方法 明胶空心胶囊采用硝酸-盐酸混合酸溶解，电热板加热敞口消解；参照中国药典二部明胶空心胶囊的检测方法，使用石墨炉原子吸收法测定铬的含量。结果与讨论 使用本文提出的方法检验明胶空心胶囊中铬的含量，处理时间约为1小时，快速；只需使用电热板加热，不需投资昂贵的微波消解仪，经济；敞口消解比密闭高压消解，安全；上机检测加标回收率94.3-110.7%之间，准确。本法快速、经济、安全、准确，可替代药典方法用于明胶空心胶囊中铬检测的前处理方法。
【关键词】电热板加热方式 明胶空心胶囊 铬 石墨炉原子吸收法
【中图分类号】R952【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）36-0106-02
前言
在四月份中央电视台《每周质量报告》栏目播出《胶囊里的秘密》，曝光河北、浙江等地不法厂商使用重金属铬超标的工业明胶，生产药用胶囊。9家药厂生产的13个批次的药品，所用胶囊的重金属铬含量超过国家标准规定2mg/kg的限量值，其中超标最多的达90多倍。这一报道在药用胶囊行业、药品食品包装行业、制药行业等多个行业掀起巨浪。
【关键词】电热板加热方式 明胶空心胶囊 铬 石墨炉原子吸收法
【中图分类号】R952【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）36-0106-02
前言
在四月份中央电视台《每周质量报告》栏目播出《胶囊里的秘密》，曝光河北、浙江等地不法厂商使用重金属铬超标的工业明胶，生产药用胶囊。9家药厂生产的13个批次的药品，所用胶囊的重金属铬含量超过国家标准规定2mg/kg的限量值，其中超标最多的达90多倍。这一报道在药用胶囊行业、药品食品包装行业、制药行业等多个行业掀起巨浪。
正规药用食用明胶跟工业明胶间差价巨大。正规骨明胶是从牛骨中提取，而工业明胶从皮革的下脚料中获得。制革的时候有一道工序是鞣质，就是加进重金属铬，这样皮革就不容易变形，这种皮革俗称“蓝矾皮”，制作成明胶之后，肯定会出现铬超标的情况。如果长期大量摄入三价铬，容易得糖尿病、高血压等疾病，并且容易引发肿瘤。六价铬毒素比较强，会损害皮肤和呼吸消化系统，导致皮炎、咽炎、气管炎、肠胃疾病等，严重的会导致肾功能衰竭，甚至癌症。
鉴于毒胶囊的危害巨大，国家药监局随后发文要求每家制剂生产企业需要配置原子吸收分光光度计和微波消解仪对明胶空心胶囊、胶囊制剂批批检。医院作为用药的最前线，以患者的健康为最大利益，有实力的应该配置原子吸收分光光度计和微波消解仪对胶囊制剂进行检验。但是按照药典的前处理方法检验明胶空心胶囊需时较长，微波消解仪的位数限制了检验的批次，不适应医院药品品种多、量少但批次多的特点。所以参照药典的检验方法，开发适应医院药剂科的检验明胶空心胶囊的前处理方法，用于医院药剂科对明胶空心胶囊的快速检验。
附：《中国药典》中明胶、明胶空心胶囊中铬元素检测方法
取样品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸5-10ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋
鉴于毒胶囊的危害巨大，国家药监局随后发文要求每家制剂生产企业需要配置原子吸收分光光度计和微波消解仪对明胶空心胶囊、胶囊制剂批批检。医院作为用药的最前线，以患者的健康为最大利益，有实力的应该配置原子吸收分光光度计和微波消解仪对胶囊制剂进行检验。但是按照药典的前处理方法检验明胶空心胶囊需时较长，微波消解仪的位数限制了检验的批次，不适应医院药品品种多、量少但批次多的特点。所以参照药典的检验方法，开发适应医院药剂科的检验明胶空心胶囊的前处理方法，用于医院药剂科对明胶空心胶囊的快速检验。
附：《中国药典》中明胶、明胶空心胶囊中铬元素检测方法
取样品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸5-10ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋
紧外套，置适宜的微波消解炉内，进行消解(按仪器规定的消解程序操作)。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕蒸气挥尽并近干，用2%硝酸转入50ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液；另取铬单元素标准溶液,用2%硝酸稀释制成每1ml含铬1.0μg的铬标准储备液，临用时，分别精密量取铬标准储备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml含铬0-80ng的对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液，以石墨炉为原子化器，照原子吸收分光光度法(附录Ⅳ D第一法),在357.9nm测定，含铬不得过百万分之二。
1.仪器与试药
1.1.仪器：上海天美AA6100原子吸收分光光度计（含石墨炉原子化装置）、电子天平、胜谱HT-200实验电热板、德国赫施曼瓶口分液器CERAMUS-classic、聚四氟乙烯50ml三角烧瓶。
1.2.试剂：铬单元素标准溶液（1000ug/ml）、购自国家有金属及电子材料分析测试中心；硝酸（优级纯）、盐酸（优级纯），购自美国默克公司；超纯水产自湖南科尔顿超纯水机。
毒胶囊 1.3.样品：A、头孢呋辛酯胶囊，规格125mg×24粒，生产厂：深圳致君制药有限公司；
1.仪器与试药
1.1.仪器：上海天美AA6100原子吸收分光光度计（含石墨炉原子化装置）、电子天平、胜谱HT-200实验电热板、德国赫施曼瓶口分液器CERAMUS-classic、聚四氟乙烯50ml三角烧瓶。
1.2.试剂：铬单元素标准溶液（1000ug/ml）、购自国家有金属及电子材料分析测试中心；硝酸（优级纯）、盐酸（优级纯），购自美国默克公司；超纯水产自湖南科尔顿超纯水机。
毒胶囊 1.3.样品：A、头孢呋辛酯胶囊，规格125mg×24粒，生产厂：深圳致君制药有限公司；
B、奥拉西坦胶囊，规格0.4g×24粒，生产厂：湖南健朗药业有限公司；C、多烯磷脂酰胆碱胶囊，规格228mg×24粒，生产厂：赛诺菲安万特（北京）制药有限公司。
2.实验方法
2.1.样品制备：
2.1.1. 对照品溶液的制备：
取铬单元素标准溶液，用2%硝酸稀释并制成每1ml含铬1.0ug的铬标准对照品储备液。
临用时，分别精密量取铬标准对照品储备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml含铬5ng、10ng、20ng、30ng、50ng的标准溶液。
2.1.2. 供试品溶液制备：
A、将胶囊制剂掰开，挤出大部分内容物后用棉签擦拭干净；再取棉签蘸取乙醚后擦拭囊体，晾干，备用。
B、精密称取上述拭净囊体0.5g，置聚四氟乙烯三角烧瓶内。
C、临用现配硝酸-盐酸混合酸，取1体积浓硝酸慢慢倒入到2体积浓盐酸中，不断用玻璃棒搅拌。
D、使用德国赫施曼瓶口分液器，往步骤B中的聚四氟乙烯三角烧瓶内添加8ml的硝酸-
2.实验方法
2.1.样品制备：
2.1.1. 对照品溶液的制备：
取铬单元素标准溶液，用2%硝酸稀释并制成每1ml含铬1.0ug的铬标准对照品储备液。
临用时，分别精密量取铬标准对照品储备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml含铬5ng、10ng、20ng、30ng、50ng的标准溶液。
2.1.2. 供试品溶液制备：
A、将胶囊制剂掰开，挤出大部分内容物后用棉签擦拭干净；再取棉签蘸取乙醚后擦拭囊体，晾干，备用。
B、精密称取上述拭净囊体0.5g，置聚四氟乙烯三角烧瓶内。
C、临用现配硝酸-盐酸混合酸，取1体积浓硝酸慢慢倒入到2体积浓盐酸中，不断用玻璃棒搅拌。
D、使用德国赫施曼瓶口分液器，往步骤B中的聚四氟乙烯三角烧瓶内添加8ml的硝酸-
盐酸混合酸，置于胜谱HT-200实验电热板上。
E、使用下表程序升温对样品加热，注意加热过程中全部实验用品均应置于通风柜中。
序号 温度 保持时间
1 120 20min
2 200 20min
3 240 10min
4 放冷至室温
F、冷却后加纯化水定容至50ml，取上清液作为供试品溶液。
2.1.3. 空白溶液制备：按2.1.2.同法制备空白溶液。
2.2.样品测定：取供试品溶液与对照品溶液，以石墨炉为原子化器，照原子吸收分光光度法实验（【中国药典】2010年版（二部）附录IV D第一法），在357.9nm处测定。
3.含量测定
3.1.标准曲线的测定：精密吸取2.1.1.中每1ml含铬5ng、10ng、20ng、30ng、50ng的标准溶液20ul，注入石墨炉原子化器，测定吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。吸光度值与标准曲线方程见下表：
E、使用下表程序升温对样品加热，注意加热过程中全部实验用品均应置于通风柜中。
序号 温度 保持时间
1 120 20min
2 200 20min
3 240 10min
4 放冷至室温
F、冷却后加纯化水定容至50ml，取上清液作为供试品溶液。
2.1.3. 空白溶液制备：按2.1.2.同法制备空白溶液。
2.2.样品测定：取供试品溶液与对照品溶液，以石墨炉为原子化器，照原子吸收分光光度法实验（【中国药典】2010年版（二部）附录IV D第一法），在357.9nm处测定。
3.含量测定
3.1.标准曲线的测定：精密吸取2.1.1.中每1ml含铬5ng、10ng、20ng、30ng、50ng的标准溶液20ul，注入石墨炉原子化器，测定吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。吸光度值与标准曲线方程见下表：
序号 浓度 吸光度
1 0ng/ml 0.004
2 5ng/ml 0.053
3 10ng/ml 0.109
4 20ng/ml 0.213
5 30ng/ml 0.316
6 50ng/ml 0.527
y=0.0105x+0.0029 R2=0.9999
3.2.定量限的测定：精密吸取2.1.1.中每1ml含铬5ng的标准溶液5ul、10ul、15ul、20ul，注入石墨炉原子化器，测定吸光度；使用3.1.标准曲线方程，计算结果和准确度。样品测定结果见下表：
进样量 对应浓度 吸光度 测定浓度 准确度
5ul 1.25ng 0.020 1.90ng 152.15%
10ul 2.50ng 0.033 3.14ng 125.60%
1 0ng/ml 0.004
2 5ng/ml 0.053
3 10ng/ml 0.109
4 20ng/ml 0.213
5 30ng/ml 0.316
6 50ng/ml 0.527
y=0.0105x+0.0029 R2=0.9999
3.2.定量限的测定：精密吸取2.1.1.中每1ml含铬5ng的标准溶液5ul、10ul、15ul、20ul，注入石墨炉原子化器，测定吸光度；使用3.1.标准曲线方程，计算结果和准确度。样品测定结果见下表：
进样量 对应浓度 吸光度 测定浓度 准确度
5ul 1.25ng 0.020 1.90ng 152.15%
10ul 2.50ng 0.033 3.14ng 125.60%
15ul 3.75ng 0.041 3.90ng 104.05%
20ul 5.00ng 0.052 4.94ng 98.99%
3.3.样品含量测定：取样品a、b、c按2.1.2.供试品溶液制备法，平衡制备供试品溶液和空白溶液；精密吸取各样品溶液20ul，注入石墨炉原子化器，测定吸光度；使用3.1.标准曲线方程，计算结果。样品测定结果见下表：
样品测定结果汇总表
样品 吸光度A 吸光度B 测定结果A（mg/kg） 测定结果B（mg/kg） 样品中含铬
空白溶液 0.003 0.003 -- --
样品A 0.055 0.057 0.49 0.51 0.5
样品B 0.043 0.040 0.38 0.31 0.3
样品C 0.037 0.039 0.32 0.34 0.3
计算公式：
20ul 5.00ng 0.052 4.94ng 98.99%
3.3.样品含量测定：取样品a、b、c按2.1.2.供试品溶液制备法，平衡制备供试品溶液和空白溶液；精密吸取各样品溶液20ul，注入石墨炉原子化器，测定吸光度；使用3.1.标准曲线方程，计算结果。样品测定结果见下表：
样品测定结果汇总表
样品 吸光度A 吸光度B 测定结果A（mg/kg） 测定结果B（mg/kg） 样品中含铬
空白溶液 0.003 0.003 -- --
样品A 0.055 0.057 0.49 0.51 0.5
样品B 0.043 0.040 0.38 0.31 0.3
样品C 0.037 0.039 0.32 0.34 0.3
计算公式：
4.方法验证
4.1.精密度试验：精密吸取样品A供试品溶液20ul，连续进样6次，测定吸光度，并求出RSD值。结果见下表：
第一次 第二次 第三次 第四次 第五次 第六次
吸光度 0.056 0.057 0.054 0.057 0.055 0.058
RSD 2.62%
4.2.重复性试验：分别取样品A的胶囊壳6份，按2.1.2.供试品溶液制备法制备供试品溶液；精密吸取各样品溶液20ul，注入石墨炉原子化器，测定吸光度；使用3.1.标准曲线方程，计算结果并求出RSD值。测定结果见下表：
样品 吸光度A 取样量 测定结果（mg/kg）
空白溶液 0.003 -- --
样品1 0.060 0.50321 0.539
样品2 0.054 0.50137 0.484
样品3 0.049 0.50021 0.438
样品4 0.049 0.49983 0.438
样品5 0.051 0.50087 0.456
样品6 0.050 0.50054 0.447
RSD 8.41%
4.3.回收率试验：分别取样品a的胶囊壳6份，分别精密加入每1ml含铬1.0ug的铬标准对照品储备液0.1ml，按2.1.2.供试品溶液制备法制备供试品溶液；精密吸取各样品溶液20ul，注入石墨炉原子化器，测定吸光度；使用3.1.标准曲线方程，计算结果并求出回收率。测定结果见下表：
样品 吸光度A 取样量 测定结果（mg/kg） 回收率
空白溶液 0.003 -- --
样品1 0.251 0.5011 2.357 92.84%
样品2 0.263 0.50097 2.471 98.57%
样品3 0.237 0.50171 2.221 86.05%
样品4 0.287 0.50001 2.705 110.24%
样品5 0.273 0.50065 2.568 103.40%
样品5 0.051 0.50087 0.456
样品6 0.050 0.50054 0.447
RSD 8.41%
4.3.回收率试验：分别取样品a的胶囊壳6份，分别精密加入每1ml含铬1.0ug的铬标准对照品储备液0.1ml，按2.1.2.供试品溶液制备法制备供试品溶液；精密吸取各样品溶液20ul，注入石墨炉原子化器，测定吸光度；使用3.1.标准曲线方程，计算结果并求出回收率。测定结果见下表：
样品 吸光度A 取样量 测定结果（mg/kg） 回收率
空白溶液 0.003 -- --
样品1 0.251 0.5011 2.357 92.84%
样品2 0.263 0.50097 2.471 98.57%
样品3 0.237 0.50171 2.221 86.05%
样品4 0.287 0.50001 2.705 110.24%
样品5 0.273 0.50065 2.568 103.40%
样品6 0.258 0.50034 2.427 96.35%
5.结果与讨论
使用本文提出的方法检验明胶空心胶囊中铬的含量，处理时间约为1小时，快速；只需使用电热板加热，不需投资昂贵的微波消解仪，经济；敞口消解比密闭高压消解，安全；上机检测加标回收率86.0-110.2%之间，准确。本法快速、经济、安全、准确，可替代药典方法用于明胶空心胶囊中铬检测的前处理方法。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典2010版.
[2] 原子吸收光谱分析应用指南--中国海洋大学出版社.
[3] 明胶药用空心胶囊铬检测方法指导原则.
5.结果与讨论
使用本文提出的方法检验明胶空心胶囊中铬的含量，处理时间约为1小时，快速；只需使用电热板加热，不需投资昂贵的微波消解仪，经济；敞口消解比密闭高压消解，安全；上机检测加标回收率86.0-110.2%之间，准确。本法快速、经济、安全、准确，可替代药典方法用于明胶空心胶囊中铬检测的前处理方法。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典2010版.
[2] 原子吸收光谱分析应用指南--中国海洋大学出版社.
[3] 明胶药用空心胶囊铬检测方法指导原则.
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