蛋白质化学实验报告
实验一低温豆粕提取大豆分离蛋白
一、原理
大豆分离蛋白的提取是根据大豆中所含的蛋白质在不同的pH时有不同的溶解度的特性而实现的。大豆粕中所含的蛋白质大部分都能溶解在水中，在pH6.5的蒸馏水中有很高的溶解度，且都能溶解于0.2%的碱液中，相反，在pH4.5时，蛋白质的溶解度非常小。所以大豆分离蛋白的提取是先用水或稀碱液从低温豆粕中萃取可溶物，用离心机分离出不溶物（豆粕渣）然后在萃取液（豆乳）中加酸（盐酸、磷酸、醋酸等）调节pH到4.2-4.5，于是蛋白质即从萃取液中沉淀出来，倾除清夜（即乳清、主要是低分子糖类、蛋白质等），将下层的蛋白质凝聚物进行水洗、浓缩、干燥即可得到等电点分离蛋白。
二、试剂及仪器
1）氢氧化钠AR级
2）盐酸AR级
3）电热恒温水浴锅
4）电热恒温干燥箱
5）离心沉淀机
6）酸度计
7）多功能电动搅拌器
三、实验步骤
在1000ml烧杯中将50克豆粕按料液比1：10的比例与水混合，温度50℃，低速搅拌30-35rpm，用1N氢氧化钠pH调至7.5，继续搅拌30分钟。悬浮液在2000rpm转速下离心15分钟，回收上清液，沉淀（豆渣）弃去。上清液边搅拌边加入1NHCl（30-35rpm），将pH调至4.5，温度30℃，继续搅拌10分钟。将悬浮液在2000rpm离心15分钟，弃去上清液（大豆乳清），回收沉淀（凝乳）并称重。
称取5克（精确到0.001克）于表面皿中，在105℃烘箱内烘干至恒重，测定凝乳的水分含
量，烘干后的凝乳存放于干燥器内保藏。其余湿凝乳置于-15℃下冷冻储藏备用。习题
1.求凝乳分离蛋白产品的含水量、蛋白含量
2.求分离蛋白生产过程的提取率、蛋白回收率、蛋白纯度一般是多少
化学实验报告3.为了提高蛋白提取率，在萃取、浆渣分离等操作中可采取什么措施
实验二凯氏定氮法测定大豆分离蛋白中蛋白质的含量
一、原理
浓硫酸和样品及催化剂一起加热沸腾，样品中蛋白质分解，其含的N变成（NH4）2SO4,碱化并蒸馏使NH3放出，将NH3蒸入酸溶液，在以标准酸来滴定，测得样品中的含氮量，从而得出样品中蛋白质含量，其反应式如下：
蛋白质RCH（NH2）COOH
2NH3浓硫酸催化剂NH浓硫酸催化剂3SO2CO2H2OH2SO（过量）（NH4）SO442
（NH4）SO42NaOH2NH4OHNa2SO42
NH4OH加热NH3H20
馏出的NH3被硼酸或标准盐酸吸收
NH3H3BO4NH4BO2H2O
2NH4BO2HCLNH4CLHBO
二、仪器
1）万分之一分析天平
2）饱和氢氧化钠溶液
3）2%硼酸溶液
4）溴甲酚绿-甲基红混合指示剂
5）催化剂：CuSO45H2O―K2SO4（1：10）
6）浓硫酸：比重1.84、无氮
7）蔗糖：分析纯
8）双氧水硫酸混合溶液
9）大豆粕、大豆分离蛋白
四、实验步骤
1）称样：称取约0.1克试样（烘干凝乳）准确到0.0001克。
2）消煮：将试样置于50ml凯氏烧瓶中，加入催化剂粉末1克，双氧水混合液3ml，轻轻摇动凯氏烧瓶使试样被硫酸润湿，将凯氏烧瓶中的液体连续沸腾，沸腾在瓶颈中部冷凝回流，待溶液消煮到无微小的碳粒呈透明的蓝绿时，在继续消煮30-60分钟，稍冷后加入少量蒸馏水，结束消煮，冷却后倾入50ml容量瓶中，再用水稀释到刻度，摇匀，备用。
3）蒸馏：以0.01N标准盐酸滴定锥形瓶中的溶液由蓝绿变为灰紫为终点。
5）空白：用0.1克蔗糖代替样品作空白测定，消耗盐酸溶液的体积不得超过0.3ml。
五、计算
粗蛋白质（干基）（V2V1）N0.014106.25100%100W（100M）
式中：V2―滴定试样时消耗标准盐酸的体积（ml）
V1―滴定空白时消耗标准盐酸的体积（ml）
N―标准盐酸的当量浓度
6.25―将氮换算成粗蛋白质的系数
0.014―每毫克当量氮的克数
W―试样重量（克）
M―试样水分含量
平行测定的结果可取算术平均值，保留小数后二位。
六、注意
1）加碱蒸馏时如有氧化铜棕沉淀发生，说明加碱量已足够。
2NaOH+CuSO4→Cu(OH)2+Na2SO4
Cu(OH)2→CuO↓+H2O
2)把吸收瓶装好后再加碱免NH3，逃逸。