ptotocol是这样的，请看哪里不妥：
蛋白银染步骤
步骤 溶液 时间
固定 甲醇 100ml
冰醋酸 25ml
加双蒸水至250ml 30min
冲洗 双蒸水 3次
敏化 甲醇 75ml
戊二醛（25%w/） 1.25ml
硫代硫酸钠(5%w/) 10ml
醋酸钠（17g）
加双蒸水至250ml 30min
冲洗 双蒸水 3次
银反应 硝酸银溶液(2.5%w/) 25ml
甲醛(37%w/) 0.1ml
加双蒸水至250ml 20min
冲洗 双蒸水 2次
显 碳酸钠(6.25g)
顺藤摸瓜的近义词甲醛(37%w/) 0.05ml
加双蒸水至250ml
2-5min
终止 EDTA-Na22H2O(3.65g)
加双蒸水至250ml 10min
冲洗 双蒸水 3次
建议使用silia的方法！！
简单，快！
本人的银染方法：
1. 固定：100ml MeOH, 24ml H Ac, 56ml 0.04%HCHO, 20ml ddH2O,洗三次，每次>=20分钟；
2. 50％EtOH洗PAGE胶三次，每次20分钟；
3. 预处理：0.02％ Na2S2O3 处理一分钟；
4. 水洗：ddH2O漂洗三次，每次20秒；
5. 染：0.8ml 20％AgNO3+72ml 0.04%HCHO处理PAGE胶20分钟；
6. 水洗：同上；
7. 显：25ml 12％Na2CO3, 24ml 0.04%HCHO, 1ml 0.02％ Na2S2O3, 漂洗10－15分钟；
8. 水洗：同上；
9. 终止：50％MeOH, 12％H Ac,10分钟。感冒症状
以上步骤从中科院生化所学来，过程和silia 的基本一致，不知道是否有出入，请大家指正。谢谢！！！
5.2.2.3 银染
1 银染液1（1000ml） ： 甲醇50％ 乙酸12％
甲醇 500ml 冰醋酸 120ml
2 银染液2（1000ml）： 甲醇30％，乙酸钠0.4M，戊二醛0.5%，硫代硫酸钠0.1%， （含乙酸 1－2ml）
甲醇300ml 乙酸钠54.4g 戊二醛10ml 硫代硫酸钠1g 乙酸1－2ml
3 显液(1000ml) 无水碳酸钠2.5% 甲醛 0.02%
无水碳酸钠25g， 甲醛1.5ml
4 硝酸银（100ml）： 20%硝酸银 （过滤后待用）
染步骤：
1 银染液1 洗2次， 每次5分钟
焦炸丸子2 银染液2 洗1次，每次30分钟
3 超纯水 洗2次， 每次1分钟
4 0.5%硝酸银 洗30分钟
5 超纯水洗5次，每次1分钟 （关键步骤，共计5分钟）显液显
6 看到各条带，则倾去显液, 1％ 乙酸中止
我感觉浸银后、显前的水洗非常关键，时间不能太长，次数不能太多，否则可能会染不上颜。但水洗不充分又可能导致背景较深。
我个人一般是用水洗三遍，每次半分钟左右。
固定液：50%乙醇，10%冰醋酸，40%水
浸泡液：30%乙醇，6.8% NaAc，50%戊二醛 0.625ml，0.2% NaS2O3•5H2O
银染液：0.1% AgNO3，0.02% 甲醛
显液：2.5% Na2CO3，0.01% 甲醛
终止液：1.46% EDTA-2Na•2H2O
silia wrote:
我室固定的蛋白银染方法，效果很不错，也很简单，步骤如下：
1）PAGE胶切下后用50％乙醇（100ml左右）洗三次，每次20分钟
2）2％硫代乙醇酸钠稀释50倍作用1分钟，双蒸水洗3次，每次20秒
3）2％硝酸银稀释10倍作用20分钟，双蒸水洗3次，每次20秒
4）6％碳酸钠溶液显，直到条带清晰为止，一般几分钟，大量水冲洗
5）加中止液10％乙酸中止即可
银染的方法种类很多，目前有文献报道的就有 100 多种。但是其准确的染机制还不是特别的清楚。大致的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显。由于银染的灵敏度很高，可染出胶上低于1 ng/蛋白质点，故广泛的用在2D 凝胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。这里介绍的是我们实验室成功运用的银染方法，对关键操作及要求做了补充！主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋 白的检测！如内源性GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究
银染操作规程
实验目的：检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。
实验原理：在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。染的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。
试剂：乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛
实验操作程序：
固定：30min或者更长时间
100ml 乙醇                40% 乙醇
25ml冰醋酸                10% 冰醋酸
加水到250ml
致敏：30min
75ml 乙醇                  30% 乙醇
17g 乙酸钠  28.2g 三水乙酸钠
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0.5g硫代硫酸钠
加水到终体积250ml
水洗：3 x 10min
银染：20min
0.625g  AgNO3
100 ul  37%甲醛 （在使用前加入）
加水到终体积250ml
水洗： 2 x 1 min  (注意把握时间，水洗时间长显速度慢，点的颜偏黄)
显：视情况而定
6.25 g Na2CO3
50 ul 37% 甲醛 （在使用前加入）
加水到终体积250ml
终止：10min
宝宝辅食添加与营养配餐3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸
加水到终体积250ml
保存：1% 冰醋酸，4 ℃
注意事项：
1．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。
2．甲醛在使用前加入。
3． 最好多配制一份显液，第一次显到溶液变混浊时换一份显液，显到点清晰。
4． 显过程很快，要注意把握时间，避免染过度。
5．银染液和显液需要预冷。
6． 所用器皿要很洁净，不用手直接接触，以免杂蛋白污染！
7． 清洗用水尽量用高纯度去离子水，蒸馏水更佳，可以减少背景着。
银染注意事项:
1. 银染主要出现在胶的表面，用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
2. 对于考马斯亮蓝染的胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。乙酸会干扰银染，因此要确保将凝胶中的乙酸彻底洗净。如果凝胶被过度银染，可用Rapid Fix脱，并用考马斯亮蓝二次染。
3. 不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染效果差。因此，不宜用银染测定不同蛋白的比例。
4. 染过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40-60 rpm.
5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程操作中都应带手套。
6. 凝胶背景呈均一的黑多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS的去离子水。
7. 如果染后有呈灰尘或烟雾状灰或棕的沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底，或是染过程时温度太低。
8. 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
服务明星9. 在最初甲醇洗脱时就应该先除去甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些干扰性物质。
10. 室温操作，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。
11. 当蛋白质中含有核酸或金属时，银染则不会奏效。改变固定剂和染之前对胶进行漂洗可以改进染效果。
12. SDS凝胶中的巯基乙醇会导致在60 KDa或67 KDa处出现两条水平线。减少巯基乙醇的用量即可避免。
13. 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染提高40倍。
14. 染使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。
15. 银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。