实验一 糖类的性质实验
（一）糖类的颜反应
一、实验目的
1、了解糖类某些颜反应的原理。
2、学习应用糖的颜反应鉴别糖类的方法。
二、颜反应
（一）α-萘酚反应
1、原理 糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。
2、器材
试管及试管架，滴管
3、试剂
莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100 mL，贮于棕瓶。用前配制。
1％葡萄糖溶液100 mL
1％果糖溶液100 mL
1％蔗糖溶液100 mL
1％淀粉溶液100 mL
0.1％糠醛溶液100 mL
浓硫酸 500 mL
4、实验操作
取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、0.1％糠醛溶液各1 mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL，慢慢立起试管，切勿摇动。观察记录各管颜。
（二）间苯二酚反应
1、原理
在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红物质。此反应是酮醣的特异反应。醛糖在同样条件下呈反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。
2、化学实验报告器材
试管及试管架，滴管
3、试剂
塞氏试剂：0.05％间苯二酚－盐酸溶液1000 mL，称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL浓盐酸中，
再用蒸馏水稀至1000 mL。
1％葡萄糖溶液100 mL
1％果糖溶液100 mL
1％蔗糖溶液100 mL
4、实验操作
  取3试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5 mL。再向3支试管中各加入塞氏试剂5 mL，充分混合。将试管同时放入沸水浴中，。观察记录各管颜。
(二)糖类的还原作用
一、实验目的
1、理解并掌握糖类的还原性质；
2、学习常用的鉴定糖类还原性的方法。
3、了解斐林氏、本尼迪克特试法检验糖的原理。
二、实验原理
还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。
三、器材
试管及试管架，水浴锅 电炉
四、试剂
1 斐林试剂
甲液 氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液。 乙液 硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液。
2 本尼迪克特试剂
3 1％葡萄糖溶液100 mL
4 1％果糖溶液100 mL
5、1％蔗糖溶液100 mL
五 实验操作
六 思考题
1、斐林氏、本尼迪克特试法检验糖的原理是什么？
2、试比较斐林氏、本尼迪克特试法的方法。

实验二 总糖的测定---蒽酮比法
一、实验目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
二、实验原理
强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿，该物质在620nm处有最大吸收。在10-100ug围其颜的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30ug左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料
1 .仪器
(1) 分光光度计
(2) 电子顶载天平
(3) 三角瓶： 50m1 X 1
(4) 大试管： 9 支
(5) 试管架，试管夹
(6) 漏斗，漏斗架
(7) 容量瓶： 50 m1 X 2
(8) 刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1
(9) 水浴锅
2 .试剂
(1) 葡萄糖标准液： l00ug/ml
(2) 浓硫酸
(3) 蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100ml浓 H2SO4中当日配制使用。
3 .材料
小麦分蘖节（或者其它材料）。
四、操作步骤
1 .葡萄糖标准曲线的制作
取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：
管号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖标准液（ ml ）
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.6
0.8
蒸馏水（ ml ）
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.4
0.2
葡萄糖含量（ ug ）
0
10
20
30
40
60
80
在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸 l0min 取出，用流水冷却，室温放置 10min ，在 620 nm 波长下比。以标准葡萄糖含量（ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。
2 .植物样品中可溶性糖的提取
将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下，准确称取 1g, 放入 50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min ，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2m1 ，置另一50m1 容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。
3 .测定
吸取lml 已稀释的提取液于大试管中，加入4.Oml 蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比波长 620nm ，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug）。
查表所得糖含量(ug)×稀释倍数
五、结果处理
六、注意事项
1 该显反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。
2 H 2 SO 4 要用高纯度的。
3 不同糖类与蒽酮的显有差异，稳定性也不同。加热、比时间应严格掌握。
七、思考题
1蒽酮比测定糖的原理是什么？
2 用水提取的糖类有哪些？
3 制作葡萄糖标准曲线应注意哪些事项？
4 分光光度计的原理是什么？使用时需要注意哪些？

实验三 粗脂肪的提取和定量测定
一 实验目的
1. 学习和掌握粗脂肪提取的原理和测定方法。
2. 熟悉和掌握重量分析的基本操作，包括样品的处理、定量转移、烘干、恒重等。
二 实验原理
本法为重量法，用脂肪溶剂将脂肪提出后进行称量。该法适用于固体和液体样品，通常将样品浸于脂肪溶剂，如乙醚或沸点为30-60度的石油醚，借助于索氏提取管进行循环抽提。本法提取的脂溶性物质为脂肪类似物的混合物，其中含有脂肪，游离脂肪酸，磷脂，酯，固醇，芳香油，某些素及有机酸等，因此，称为粗脂肪。
用该法测定样品含油量时，通常采用沸点低于60度的有机溶剂，此时，样品中结合状态的脂类（脂蛋白）不能直接提取出来，所以该法又称为游离脂类定量测定法。
三 仪器、试剂和材料
1 .仪器
索式提取器，分析天平，烧杯，烘箱，干燥器，恒温水浴，脱脂棉，脱脂滤纸，镊子
2 试剂和材料
石油醚 芝麻或者花生等油料种子。
四、实验步骤
1.样品的准备
将花生在80度烘箱烘去水分，烘干时需避免过热，冷却后准确地称取1克左右放入研钵中研碎，再用滤纸将样品包裹好放入索氏提取管。注意勿使纸包样品高于提取管的虹吸部分，研磨后的研钵应用滤纸擦净并将滤纸放入提取管，用少量溶剂洗涤研钵，将溶剂倒入提取管中
2.抽提
2.1洗净提取瓶于105度烘干至恒重，记下其重量。装入石油醚达提取瓶容积的一半，连接提取器各部分，不能漏气（不能用凡士林或真空脂）。
2.2 加热提取：使石油醚每小时循环10-20次，约2-2.5小时，用滤纸粗略判断脂肪是否提取完全。
2.3 蒸去石油醚，烘干至恒重。
3.称量计算
          粗脂肪%=脂肪重÷样品重×100%
思考题
1、索式提取法提取的为什么是粗脂肪？
2、做好本试验应注意哪些事项？
3、本实验装置磨口处为什么不能涂抹凡士林或真空脂？

实验四 总氮量的测定——凯氏定氮法
一、实验目的
1、学习微量凯氏定氮法的原理
2、掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标准硫酸铵含量的测定，未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。
二、实验原理
凯氏定氮法常用于测定天然有机物（如蛋白质，核酸及氮基酸等）的含氮量。
天然的含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此时程称之为“消化”。
但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。
浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氮，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量，一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中的氢离子结合，生成铵离子，使溶液中氢离子浓度降低。然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的当量数（相当于待测物中氨的当量数）计算出待测物中的氮量。