(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书 | ||
(10)申请公布号 CN 104894276 A (43)申请公布日 2015.09.09 | ||
(21)申请号 CN201510339164.1
(22)申请日 2015.06.18
(71)申请人 福建省农业科学院茶叶研究所;王让剑
地址 355015 福建省宁德市福安市社口镇湖头洋1号
(72)发明人 王让剑 高香凤 杨军 孔祥瑞 郭吉春
(74)专利代理机构 福州元创专利商标代理有限公司
代理人 蔡学俊
(51)Int.CI
权利要求说明书 说明书 幅图 |
(54)发明名称
(57)摘要
| 乌龙茶的种类 本发明提供一种快速鉴定茶树种质乌龙茶适制性的分子标记方法，包括以下步骤：（1）待鉴定茶树种质基因组DNA提取；（2）特定的SSR荧光标记引物合成；（3）以待鉴定茶树种质基因组DNA为模板，利用特定的SSR荧光标记引物进行PCR扩增；（4）PCR扩增产物检测，获得待鉴定茶树种质特定位点上的基因型；（5）分析待鉴定茶树种质基因型。本发明通过简单的实验操作和分析即可筛选出适制乌龙茶的茶树种质，整个过程仅需1-2个工作日即可；在乌龙茶品种选育中应用本发明进行分子标记辅助选择育种，一定程度上可以实现乌龙茶品种定向育种，减少乌龙茶新品种选育的盲目性；应用本发明可初步掌握多个待鉴定茶树种质间的遗传背景与亲缘关系。 | |
法律状态
法律状态公告日 | 法律状态信息 | 法律状态 |
权 利 要 求 说 明 书
1.一种快速鉴定茶树种质乌龙茶适制性的分子标记方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
（1）待鉴定茶树种质基因组DNA提取；
（2）特定的SSR荧光标记引物合成；
（3）以待鉴定茶树种质基因组DNA为模板，分别利用特定的SSR荧光标记引物进行PCR扩增；
（4）PCR扩增产物检测，分别获得待鉴定茶树种质特定位点上的基因型；
（5）分析待鉴定茶树种质基因。
2.根据权利要求1所述的一种快速鉴定茶树种质乌龙茶适制性的分子标记方法，其特征在于：所述步骤（1）具体步骤为：
将研钵中加入3mL1.5%CTAB溶液，取2.0g样品放到研钵中研磨均匀，吸取1.0mL研磨溶液转入2.0mL离心管中，置65℃水浴1h，间隔15min轻轻混匀1次；
冷却后，加入600uL的氯仿：异戊醇，其体积比为24:1，混匀，12000r/min，离心15min；
吸上清，转入新的1.5mL离心管，重复步骤1次；
吸上清，转入新的离心管中，加入1/3体积的3mol/L NaAc和1mL-20℃预冷的无水乙醇，混匀后置于-20℃静置30min；
12000 r/min，离心10min，弃上清；
加入75%乙醇洗涤2次，置于吸水纸上倒置晾干；
加入50uLddH<sub>2</sub>O溶解，即为DNA。
3.根据权利要求1所述的一种快速鉴定茶树种质乌龙茶适制性的分子标记方法，其特征在于：所述步骤（2）中：
标记引物信息为：
TM352-F:CTTCTTCCTGTCGGGTTGAG，TM352-R:GTCAACGGCCTATAACGGAA；
TM445-F:CCCAAATCCCAAGCTGTAGA，TM445-R:ACGATCGAGCCTGCAATACT；
标记引物荧光染料为：
6-FAM、TET、HEX、TAMRA、ROX、Cy3、Cy5中的任意一种。
4.根据权利要求1所述的一种快速鉴定茶树种质乌龙茶适制性的分子标记方法，其特征在于：所述步骤（3）中：
PCR反应体系：ddH<sub>2</sub>O 16μL，10×Buffer 3μL，10 mmolL<sup>-1 </sup>dNT
P 3μL，MgCl<sub>2 </sub>2μL，10μmolL<sup>-1</sup>F、R引物各1.5μL，0.5U Taq酶1μL，模板DNA 2 μL；
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