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ｐｃＤＮＡ３．０－ＣＢＰ真核表达质粒的构建及对肺腺癌ＳＰＣ—Ａ１细胞的影响
周栋魏万胜苏云峰王志强王成苟云久
【摘要】目的观察外源性ＣＢＰ基因稳定转染对人肺腺癌ＳＰＣ－Ａ１细胞体外牛长的影响。方法构建ＣＢＰ真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．０．ＣＢＰ，应用ｐｃＤＮＡ３．０－ＣＢＰ和窄载体质粒ｐｃＤＮＡ３．Ｏ（一），脂质体转染法转染体外培养的人肺腺癌细胞株ＳＰＣ—Ａ１，Ｇ４１８（８００ｍｓ／Ｌ）筛选出抗性克隆。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转染前后ＣＢＰ蛋白水平变化，噻唑蓝（Ｍ１Ｔｒ）比法分析细胞生长抑制作用，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ体外侵袭实验和Ｗｏｕｎｄ．ｈｅａｌｉｎｇ实验对细胞进行侵袭和迁移能力研究。结果转染ＣＢＰ基因的细胞株有目的基因整合和相应蛋白高表达。ＭＴＹ检测ｐｃＤＮＡ３．０－ＣＢＰ转染组活细胞吸光度（Ｏ．２７８７±０．０７８６）低于未转染组（０．５０８９±０．１３０１）和ｐｅＤＮＡ３．Ｏ（一）空载体转染组（０．４８０４±０．１５４７）。ｐｃＤＮＡ３．０－ＣＢＰ转染组与两对照组吸光度的差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。细胞侵袭实验表明ｐｃＤＮＡ３．０．ＣＢＰ转染组穿透滤膜数（３．５２±０．７７）明显少于未转染组（８．１７±０．８６）和空载体转染组（８．２２±１．３０），转染组与两对照组侵袭力的差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。细胞迁移实验转染组细胞迁移数（７１．３０±７．６８）明显少于未转染组
（１１９．４０±８．３８）和空载体转染组（１１１．４１±１２．ｓ６），转染组与两对照组迁移力的差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。结论外源性ＣＢＰ基因稳定转染可抑制人肺腺癌ＳＰＣ．Ａ１细胞的恶性表型，町能通过对Ｓｒｃ家族激酶（ＳＦＫｓ）的负反馈调节抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭。
【关键词】肺腺癌；基因转染；侵袭
ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｐｃＤＮＡ３．０．ＣＢＰｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｓｏｎｌｕｎｇａｄｅｎｃａｒｃｉｎｏ－ｎｌａｅｅｌｌｌｉｎｅＳＰＣ．ＡｌｚＪＦ，Ｄ￡，Ｄｏｎｇ，ＷＥ＇／Ｗａｎ．ｓｈｅｎｇ，ＳＵＹｕｎ一膨，ｌｇ，ｅｔａ１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃＳｕｒｇｅｒｙ．ＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌｏ厂ＬａｎｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。Ｌａｎｚｈｏｕ７３００３０，Ｃｈｉｎａ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｘｏｇｅｎｏｕｓｗｉｌｄＣＳＫ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＢＰ）ｇｅｎｅｓｔａｂｌｙｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｗｔｈｏｆｌｕｎｇａｄｅｎｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｉｎ
ｖｉｔｒｏ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｕｋａｒｙ—ｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｐｃＤＮＡ３．０．ＣＢＰｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ｈｕｍａｎｌｕｎｇｅ
ｅｌｌｌｉｎｅＳＰＣ—Ａ１ｗａｓｔｒａｎｓ－ｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｐｃＤＮＡ３．０．ＣＢＰｍｏｃｋｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄｐｌａｓｍｉｄｐｃＤＮＡ３．０（一）ｗｉｔｈｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００，ａｎｄｃｅｌｌｓｔｈａｔｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＣＢＰｓｔａｂｌｙｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔｂｙｃ４ｌ８（８００ｍｓ／Ｌ）．ＣｈａｎｇｅｏｆＣＢＰｐｍｔｅｉｎｌｅｖｅｌｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎ．ｂｌｏｔ．ａｎｄｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｗａｓｔｅｓｔｅｄｂｙＭｔｉｔａｓｓａｙ．Ｔｒａｎｓｗｅｌｌａｎｄｗｏｕｎｄ－ｈｅａｌｉｎｇｍｅｔｈ－ａｄｓｗｅＩ．ｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｄｉｆｉｅｒｅｎｃｅｏｆｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄａｎｄｎｏｎ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＣＢＰｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｉｎｐｃＤＮＡ３．０．ＣＢＰｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄＳＰＣ—ＡｌｃｅｌｌｓｗａｇｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｓｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｃｏｎｔｒｏｌＳＰＣ．ＡｌｃｅｌｌｓａｎｄｐｅＤＮＡ３．０（一）ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄＳＰＣ．Ａｌｃｅｌｌｓ．ＴｈｅＭ，Ｉ－Ｉ．ａｓｓａｙｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅａｂｓｏｒｂａｌｉｃｅ（Ａ）ｏｆＣＢＰｇｏｎｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ（０．２７８７±０．０７８６）ｈａｄＩｅｓｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｔｈａｎｃｏｎｔｒｏｌｃｅｌｌｓ（０．５０８９±０．１３０１）ａｎｄｐｃＤＮＡ３．０（一）ｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄｃｅｌｌｓ（０．４８０４４－０．１５４７，Ｐ＜０．０１）．ＢｏｄｙｅｎｃｈａｍｂｅｒａｓｓａｙｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈｅｈｕｍｂｅｔｏｆｍｉｇｒａｔｅｄＣＢＰｇｅｎｅｔｒａ
ｎｓｆｅｃｔｅｄｃｅＵｓｗａｓ（３．５２±０．７７），ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｅｓｓｔｈａｎｉｎｃｏｎｔｒｏｌ
ｃｅｌｌｓ（８．１７±０．８６）ａｎｄｐｃＤＮＡ３．０（一）ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｅｅｌｌｓ（８．２２±１．３０，Ｐ＜０．０１）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅＣＢＰｇｅｎｅ。ａｓｒｅｃｅｎｔｌｙｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎ，ｃａｎｒｅｓｔｒａｉｎｍａｌｉｇｎａｎｔｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｌｕｎｇａｄｅｎｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｍａｙｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｉｎｅｏｎｓｔｍｅｆｉｏｎｏｆｎｅｇ－ａ“ｖｅｆｅｅｄｂａｃｋｌｏｏｐｏｆＳＦＫｓｔｏｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｇｒｏｗｔｈ．ｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｌｕｎｇｃｅｌｌｓ．ＩＫｅｙｗｏｒｄｓ】Ｌｕｎｇａｄｅｎｃａｒｃｉｎｏｍａ；Ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ；Ｉｎｖａｓｉｏｎ
ＣＳＫ结合蛋白ＣＢＰ（ＣＳＫ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）／ＰＡＧ
（ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＧＥＭｓ）是２０００年
Ｂｒｄｉｃｋａ等‘１１和Ｋａｗａｂｕｃｈｉ等‘２１分别独立发现的穿膜
蛋白，它的发现填补了Ｓｒｃ羧基端激酶（ＣＳＫ）对Ｓｒｃ家
Ｉ）Ｏｌ：１０．３７６０／ｅｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２００９．１１．００９
童砉会项日：什肃省自然科学基金资助项口（０９６Ｉ：ＬＩＺＡ０６９）
作者单位：７３００３０兰州大学第二医院胸心外科·胸。心夕卜科·
族激酶负反馈调节机制的循环空白。我们前期研究表
明ＣＢＰ在非小细胞肺癌中表达下调＂１，本实验将野生
型ＣＢＰ转染人肺腺癌ＳＰＣ—Ａ１细胞，观察其对肿瘤细
胞增殖、迁移和侵袭力的影响，探讨ＣＢＰ在肺腺癌增
殖转移中的作用和机制，从而为肺癌基因提供
依据。
万方数据
生堡塞墅处叠塞盛！Ｑ鲤生！！旦筮堑鲞筮！！塑￡丛垦』旦墨Ｐ墨！堡：盟型！坐垒坚！Ｑ塑：：兰垒：盟！：！！
buchi
材料与方法
１．材料：重组质粒ｐＢＳＫ—ＣＢＰ和抗ＣＢＰ兔源ＥＩ制
单克隆抗体由中国科学院卜海生命科学研究院细胞与
生物化学所提供，ｐＢＳＫ—ＣＢＰ含有约１．３ｋｂ人基因ＣＢＰ
全长ｃＤＮＡ片段及筛选标志ｎｅｏ基因，其克隆位点在
ＸｂａＩ和ＢａｍＨｌ之间。人肺腺癌细胞株ＳＰＣ．Ａ１由兰
州大学医学院中心实验室提供。ｐｃＤＮＡ３．０（一）购自
美国ｌｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。
２．重组质粒ｐｃＤＮＡ３．０－ＣＢＰ构建：将ｐｃＤＮＡ
３．０（一）用限制性内切酶ＸｂａＩ和ＢａｍＨＩ双酶切，玻璃
奶法回收做载体。质粒ｐＢＳＫ—ＣＢＰ经ＸｂａＩ和ＢａｍＨＩ
酶切后，玻璃奶法回收做日的基因，大小约１．３ｋｂ。将
上述载体和目的基因用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化大肠
杆菌ＤＨＳｃｔ感受态细胞。铺板、挑克隆，重组克降提取
质粒用ＸｂａＩ和ＢａｍＨＩ双酶切鉴定，阳性克隆命名为
ｐｃＤＮＡ３．０－ＣＢＰ。
３．细胞的基因转染与筛选：采用阳离子脂质体ｌｉ－
ｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ２０００介导法将ｐｃＤＮＡ３．０．ＣＢＰ转入
ＳＰＣ—Ａ１细胞，同时转染ｐｃＤＮＡ３．ｏ（一）作为空载体对
照，其方法参照试剂盒的操作指南进行，应用Ｇ４１８进
行筛选，在１４ｄ左右出现Ｎｅ０７阳性克隆，利用克隆柱
将阳性克隆转移到２４孔板中，长满后转移至培养瓶中
培养、传代并冻存。
４．免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）法：收集１×１０７个转染
细胞，含１０ｍｍｏｌ／ＬＰＭＳＦ蛋白裂解液裂解细胞，Ｂｒａｄ—
ｆｏｒｄ法测蛋白浓度。样品于１００℃水浴５ｍｉｎ，取等鼍
蛋白上样进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳。电泳后，将蛋白转移
至硝酸纤维膜ｔ，丽春红染，１×ＮＥＴ封闭１ｈ，随后
与特异性抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，方法同分子克隆。实
验中所用第一抗体为ＣＢＰ兔源自制单克隆抗体，二抗
用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的羊抗兔单克隆抗体
（１：３０００），杂交膜用ＥＣＬ化学发光试剂于暗室中显影
后并照相。
５．噻唑蓝（ＭＹｒ）试验：将经筛选、扩增培养后的
各组细胞分别以每孔５×１０４＋／ｍｉ接种于９６孔板，
每组３个复孔，每孔体积１００山。在３７ｏＣ、５％ＣＯ：及
饱和湿度条件下培养，以含１０％胎牛血清培养２４ｈ，
每孔加入Ｍ１ｆＩ’溶液（５ｇ／Ｌ）２０“１，３７℃继续孵育４ｈ，
吸弃培养液，每孔加入１００ＩｘｌＤＭＳＯ，振荡１５ｍｉｎ，在
酶标仪５７０ｒｉｍ波长下测其吸光度值（Ａ）。。
６．细胞Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ体外侵袭实验：Ｍａｔｒｉｇｅｌ构造人
工基底膜，将Ｍａｔｒｉｇｅｌ溶液６０—８０汕ｌ滴于直径６．５ｃｍ
的聚碳酸酯微孔膜上，均匀铺平，聚合成凝胶备用。在
Ｔｒａｎｓｗｅｌｌｈａｍｂｅｒ上室底部铺垫一层Ｍａｔｒｉｇｅｌ凝胶，下．１４２１·
室中加入趋化因子６００一。在上室孔中加入细胞ｌ×
１０５个／孔，细胞悬液体积１００—２００山ｌ，共设未转染、
ｐｃＤＮＡ３．０（一）空载体转染和ｐｃＤＮＡ３．０．ＣＢＰ转染３
组，每组３孔。置于培养箱培养２４ｈ，待培养结束后，
弃去七室液体。小心取出上室，用湿棉签擦去膜上未
穿过膜的细胞，０．１％结晶紫染，冲洗干净后双侧封
片，８０℃烤干，倒置显微镜观察穿膜细胞数，每张膜中
央部分和周围部分随机各取３个视野，计数每个视野
内穿过８斗ｍ微孔的细胞数。
７．细胞Ｗｏｕｎｄ—ｈｅａｌｉｎｇ体外迁移实验：将３组待测
细胞常规消化后，以１×１０６细肜孔、１０％ＦＢＳ／
ＤＭＥＭ种植到６孔板内过夜培养至细胞基本融合。
次日１００一微量移液头在６孔板内垂直划痕，Ｈａｎｋ液
冲洗２次后加入无血清培养基培养２４ｈ后相差显微
镜下随机选择５个１００×视野内计算迁移到划痕窄隙
中的细胞总数。共设未转染、ｐｃＤＮＡ３．０（一）空载体
转染和ｐｃＤＮＡ３．０一ＣＢＰ转染３组，每组重复４次。
８．统计学方法：应用ＳＰＳＳ１０．ｏ统计软件分析，各
组间差异分析应用两样本ｔ检验。
结果
１。重组质粒ｐｃＤＮＡ３．Ｏ—ＣＢＰ的酶切鉴定：重组质
粒ｐｃＤＮＡ３．０－ＣＢＰ随机挑取阳性克隆，用碱裂解法提
质粒，ＸｂａＩ和ＢａｍＨＩ双酶切鉴定，１．５％琼脂糖凝胶电
泳，得到５．４ｋｂ载体片段和１．３ｋｂ目的片段。表明
ＣＢＰ片段插入到载体ｐｃＤＮＡ３．０（一）中（图１）。
Ｍ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒ
图１ｐｃＤＮＡ３．０．ＣＢＰ双酶切鉴定
２．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测３组细胞中ＣＢＰ的表达：
Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析显示，与对照组和窄载体组比较，稳
定转染ＣＢＰ基因后的ＳＰＣ．ＡＩ细胞ＣＢＰ蛋白表达明
显升高（图２）。
３．３组细胞生长能力的变化：用ＭｒｒＩ＇法检测肺腺
癌ＳＰＣ—Ａ１细胞体外增殖能力，发现ｐｃＤＮＡ３．０－ＣＢＰ
转染组与其他两组细胞差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１），万方数据
·１４２２·生垡塞验处挝盈盔！Ｑ螋生！！旦箜堑鲞筮！！翅￡！也』坠Ｅ！！班。塑型！坐垃１２Ｑ鲤：！垡：堑：塑！：！１
１：末转染组；２：ｐｅＤＮＡ３．０（一）转染组；３：ｐｃＤＮＡ３．
０．ＣＢＰ转染组
图２Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ检测三组ＳＰＣ—Ａ１细胞的蛋白表达水平而ｐｃＤＮＡ３．０（一）
转染组与未转染组间差异无统计学意义，提示转染ＣＢＰ基因可以抑制肺腺癌ＳＰＣ．Ａ１细胞增殖（图３）。
Ｏ．７
０６
Ｏ．５
ｊ粤０４
≮０．３
０２
０．１
０
未转染组空载体转染组再组体转染组
８Ｐ（０．０１
图３三组肺腺癌ＳＰＣ－Ａ１细胞增殖能力比较４．转染前后细胞侵袭能力的变化：Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验结果显示，ｐｃＤＮＡ３．０－ＣＢＰ组细胞较未转染对照组和空载体转染组细胞的侵袭能力明显下降（图４）。ｐｃＤＮＡ３．０一ＣＢＰ组侵袭至滤膜下表面的细胞数均低于对照组和宅载体组的细胞数（Ｐ＜０．０１）；而对照组和空载体组的细胞侵袭至滤膜下表面的细胞数比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），表明通过转染ＣＢＰ基因显著降低细胞的侵袭能力。
鼎
星；
最
杯
卿
术转染绀空我伟转染组重组体转染组
４Ｐ＜Ｏ．０１
图４三组肺腺癌ＳＰＣ－Ａ１细胞侵袭能力比较５．转染前后细胞迁移能力的变化：“划痕”后使用无Ｉ血清培养基继续培养２４ｈ，然后在倒置相差显微镜下网格目镜随机选择５个１００×视野下大网格内计算迁移到划痕空隙中的细胞总数，ｐｃＤＮＡ３．０．ＣＢＰ组与对照组比较迁移能力下降（图５）。ｐｃＤＮＡ３．０一ＣＢＰ组迁移到划痕空隙中的细胞数均低于对照组和率载体组的细胞数（Ｐ＜０．０１）；而对照组和空载体组迁移到划痕空隙中的细胞数比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），表明通过转染ＣＢＰ基因显著降低细胞的迁移能力。
１４０
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讨论
Ｓｒｃ家族的酪氦酸蛋白激酶过度表达常引起细胞的癌变，ＣＳＫ可以磷酸化Ｓｒｃ碳端酪氨酸，使Ｓｒｃ构象发生改变，进而失活，这是Ｓｒｃ家族成员激酶活性凋节的苇要方式之一。ＣＢＰ的发现使得ＣＳＫ对Ｓｒｃ家族激酶调控的相关研究进一步深入¨，２Ｊ。ＣＢＰ定位在一个特殊的质膜区域一脂筏（１ｉｐｉｄｒａｆｔ），其胞内段包含了一系列的酪氨酸，其中９个酪氨酸都是Ｓｒｃ激酶潜在的底物位点ＨＪ。本研究中采用脂质体介导成功地将野生型ＣＢＰ质粒导人肺腺癌ＳＰＣ—Ａ１细胞中，并在其中得到较高的表达。经统计学分析表明，转染了ＣＢＰ摹因的ＳＰＣ．ＡＩ细胞的增殖能力明显低于对照组和空载体组。我们同时还进行了肿瘤细胞的侵袭、迁移运动能力的实验测定，结果表明ＣＢＰ的表达水平越高，细胞的侵袭能力和迁移运动能力就越低。证实了ＣＢＰ可显著抑制肺腺癌ＳＰＣ—Ａ１细胞的侵袭和迁移过程，提示ＣＢＰ可能通过对Ｓｒｃ激酶的负反馈调节机制在肺腺癌ＳＰＣ—Ａ１细胞的侵袭中发挥作用。本实验证实ＣＢＰ可硅著抑制肺腺癌ＳＰＣ—ＡＩ细胞的侵袭和迁移过程，但是否与上述信号通路的调控有关，还有待于进一步研究。
参考文献
ｆｌ１ＢｒｄｉｃｋａＴ，ＰａｖｌｉｓｔｏｖａＤ，ＬｅｏＡ，ｅｔａ１．Ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｇｌｙｃｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ—ｅｎｒｉｃｈｅｄｍｉｃｒｏｄｏｍａｉｎｓ（ＰＡＧ），ａｎｏｖｅｌｕｂｉｑｕｉｔｏｕ．，·－
ｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄ
ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ
ａｄａｐｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ，ｂｉｎｄｓｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅＣＳＫａｎｄｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＴｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．ＪＥｘｐ
Ｍｃｄ。２０００，１９１：１５９１－１６０４．
［２１ＫａｗａｂｕｃｈｉＭ，ＳａｔｏｍｉＹ，’Ｉ＇ａｋａｏＴ，ｅｔａ１．Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｍｎｅｐｈｅｓｐｈｏｐｒｏ－
ｔｅｉｎＣｂｐｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆ
Ｓｒｅ—ｆａｍｉｌｙｔｙｍｓｉｎｅ
ｋｉｎａｓｅｓ．Ｎａ－ｌｕｒｅ，２０００，４０４：９９９－１００３．
［３］周栋，邹良建，黄盛东，等．ｓｒｃ羧基端激酶结合蛋白在非小细胞肺癌中的表达．中华实验外科杂志，２００７．２４：６３７
ｆ４】ＭａｔｓｕｏｋａＨ，ＮａｄａＳ，ＯｋａｄａＭ，ｅｔａ１．ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＣＳＫ，ｍｅｄｉａｔｅｄｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＳｍｆａｍｉｌｙｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｃｓｉｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃ—ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ。２００４，２７９：５９７５－５９８３．
（收稿Ｈ期：２００８—１０－２０）万方数据
pcDNA3.0-CBP真核表达质粒的构建及对肺腺癌SPC-A1细胞的
影响
刊名：
中华实验外科杂志
英文刊名：CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
年，卷(期)：2009,26(11)
1.Matsuoka H;Nada S;Okada M Mechanism of CSK-mediated down-regulation of Src family tyrosine kinases in epidermal growth factor signaling 2004
2.周栋；邹良建；黄盛东Src羧基端激酶结合蛋白在非小细胞肺癌中的表达[期刊论文]-中华实验外科杂志 2007(5)
3.Kawabuchi M;Satomi Y;Takao T Transmembrane phosphoprotein C bp regulates the activities of Src-family tyrosine kinases[外文期刊] 2000
4.Brdicka T;Pavlistova D;Leo A Phosphoprotein associated with glycospbingolipid-enriched microdomai
ns (PAG),a novel ubiquitously expressed transmembrane adaptor protein,binds the protein tyrosine kinase CSK and is involved in regulation of T cell activation 2000
本文链接：d.g.wanfangdata/Periodical_zhsywk200911009.aspx