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第16卷  第12期    2014 年 12 月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 16  No. 12 Dec .，2014
KAI1基因是1995年Dong 等[1]从前列腺杂交瘤
细胞系中克隆得出，最初认为是前列腺癌的特异性转移抑制基因，后发现它在多种组织中都有表达，研究发现[2-3]KAI1基因表达与肿瘤的分化程度、临床分期及是否伴有淋巴结转移密切相关，低表达可能与NSCLC 的恶性进展有关，因此在理论上上调KAI1基因的表达就有可能达到抑制肿瘤细胞侵袭转移的目的。在前期实验中我们发现，清金得生片有调节小鼠自身免疫系统、抑制肿瘤生长、抵制癌细胞扩
散的作用[4]
。本研究旨在探讨Lewis 肺癌细胞小鼠KAI1基因表达受清金得生片的影响，从分子水平阐述清金得生片的抗肿瘤机制。
1 材料与方法1.1 实验材料
①动物：C57BL/6系雌性小鼠90只，18~20 g，SPF 级，构自广东省实验动物中心。②清金得生片，构自广州中医药大学第一附属医院。③Lewis 肺癌
瘤株：购自广州中医药大学第一临床医学院肿瘤研究所。④仪器：ABI3900台式高通量DNA 合成仪，科大创新HC-3018R 高速冷冻离心机，ABI9700PCR 仪，ABI7500全自动荧光定量PCR 仪，基因检测及所有仪器均由中山大学达安基因股份有限公司提供。
1.2 实验方法
90只小鼠常规饲养1周适应环境后，随机分为3组，每组30只。各组均称体重，依体重调整给药剂量。正常组：同等条件下饲养，不造模，常规饲养1周后，予等量生理盐水灌胃，灌胃剂量1 mL/100 g，每天灌胃1次；模型对照组：选用移植生长良好的Lewis 肺癌，按1∶3比例制成瘤细胞悬液，常规接种在小鼠右前肢腋窝皮下。常规饲养1周后，予等量生理盐水灌胃，灌胃剂量1 mL/100 g，每天灌胃1次；组（清金组）：选用移植生长良好的Lewis 肺癌，按1∶3比例制成瘤细胞悬液，常规接种在小鼠右前肢腋窝皮下。常规饲养1周后，将清金得生片研碎
Lewis肺癌细胞小鼠KAI1基因表达受清金得生片影响的研究
刘展华1，崔雁飞2，聂慧娟3
（1.广州中医药大学第一附属医院肿瘤科，广东 广州 510405；2.恩施州中心医院，湖北 恩施 445000；
3.广州中医药大学，广东 广州 510405）摘 要：目的：研究清金得生片对Lewis 肺癌细胞小鼠KAI1基因表达的影响。方法：按8.1 g·kg -1·d -1剂量的
清金得生片灌胃接种了Lewis 肺癌细胞的小鼠，并设立模型对照组及正常对照组；采用荧光定量PCR 技术检测小鼠KAI1基因的表达，观察KAI1基因表达受清金得生片的影响。结果：KAI1基因在肿瘤组织中的表达显著低于正常肺组织及癌旁组织。结论：清金得生片抗肿瘤作用可能与其上调KAI1基因的表达有关。
关键词：Lewis 肺癌细胞；KAI1基因；清金得生片
中图分类号：R734.2      文献标志码：A      文章编号：1673-842X  (2014) 12- 0010-  02
收稿日期：2014-05-03
基金项目：广东省科技计划立项课题（2011B060300030）作者简介：刘展华（1965-），女，广东潮州人，主任中医师，博士，研究方向：肺癌的中西医结合。
Effect of Qingjin Desheng Tablet on KAI1 Gene Expression of
Mice Inoculated with Lewis Lung Carcinoma Cells
LIU Zhanhua 1，CUI Yanfei 2，NIE Huijuan 3
（1. Oncology Department，The First Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，Guangdong，China；2.The Central Hospital of Enshi Autonomous Prefecture，Enshi 445000，Hubei，China；3.Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，Guangdong，China）
Abstract：Objective ：The purpose of this article is to study the effects of Qingjin Desheng Tablet on
the expression of KAI1gene in mice inoculated with Lewis lung carcinoma cells. Method ：There were three groups. The treatment group's mice were lavaged with Qingjin Desheng Tablet，8.1 g·kg -1·d -1 and the sham control group lavaged with saline at the same dose as the treatment group，and untreatment group. We detected the expression of KAI1gene in mice and preformed fuorescence quantitative PCR. Result ：The expression of KAI1gene in lung carcinoma was signficantly lower than that in nomal lung tissues and paracancerous tissues. Conclusion ：Anti-tumor effect of this drug may be related to KAI1 gene upregulation.
Key  words：Lewis lung carcinoma cells；KAI1 gene；Qingjin Desheng Tablet DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2014.12.003
16卷                                  辽宁中医药大学学报             
后，用蒸馏水配制成1 g/mL，按8.1 g·kg-1·d-1灌胃给药，每天灌胃1次。
1.3 取材及样本处理
各组小鼠于接瘤次日开始按以上方法喂养，连续10 d，停药次日颈椎脱臼位法处死小鼠，分别完整剥离模型组及清金组右前肢腋窝皮下肿瘤组织，并用游标卡尺测量小鼠肿瘤直径，电子天平秤取瘤重；取模型组及清金组癌旁组织及正常组肺组织。
1.4 检验指标及方法
将收集的标本冻存于液氮中，送免疫组化室做冰冻切片，采用荧光定量PCR技术检测标本中KAI1-mRNA的表达，同时以TBP作为内参基因。1.5 统计方法
buchi采用统计软件包SPSS13.0，计量资料两组间比较用t检验，多组间比较用方差分析；P<0.05为差异有显著性意义。
2 结 果
2.1 正常组小鼠的肺组织、模型组小鼠瘤体及癌旁组织、清金组小鼠的瘤体及癌旁组织中KAI1-mRNA 的表达
表1示：从KAI1/TBP值可见，与正常肺组织对比，无论是模型组还是清金组肿瘤组织中KAI1-mRNA的表达下降，差异有显著性意义（P<0.05）；清金组与模型组对比，清金组不论是瘤体内还是癌旁组织中KAI1-mRNA表达均有上调，差异有显著性意义（P<0.05）。
表1 各组小鼠KAI1基因表达比较（%，x—±s）
组别n KAI1/TBP 正常对照组肺组织30  1.035±0.240
模型对照组瘤体300.131±0.035★
模型对照组癌旁组织30  1.430±1.123清金组瘤体300.220±0.099★☆
清金组癌旁组织30  2.560±0.977#
注：与正常肺组织比较，★P<0.05；与模型组瘤体比较，☆P<0.05；与模型组癌旁组织比较，#P<0.05。
2.2 模型组与清金组瘤重及肿瘤直径比较
表2示：与模型组比较，清金组瘤重明显减轻，差异有显著性意义（P<0.05），肿瘤直径虽有缩小，但差异无统计学意义（P>0.05）。
表2 两组小鼠瘤重及肿瘤直径比较（x—±s）组别n瘤重（g）肿瘤直径（cm）模型对照组30  2.62±0.53  1.96±0.23
清金组30  2.16±0.38☆  1.90±0.23★
注：与模型组瘤重比较，☆P<0.05；与模型组肿瘤直径比较，★P>0.05。
3 讨 论
KAI1基因作为一种新的肿瘤转移抑制基因，在多种肿瘤中所起的转移抑制作用已经引起了国内外学者的广泛关注，越来越多的研究相继开展。目前多项研究提示KAI1基因表达下降或丧失与多种恶性肿瘤的转移有关[5-9]。KAI1基因的表达与肺癌转移的关系也有不少研究。李珊珊等[9]利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Northem blot杂交法分析不同转移潜能人肺癌细胞系中KAI1-mRNA的表达，并用聚合酶链反应-单链象多态性分析（PCR-SSCP）检测其与突变的关系。结果发现：肺癌细胞的转移潜能与KAI1基因的表达量有关。Adachi等[10]用RT-PCR方法对非小细胞肺癌患者组织中KAI1/ CD82进行检测。
结果发现KAI1/CD82的表达与患者年龄性别、组织学类型无显著相关性，但与淋巴结转移、肿瘤的TNM分期和病理分级有显著相关性。KAI1基因在正常肺组织、癌组织高分化组、癌组织低分化组表达呈下降趋势。KAI1表达阳性的生存率明显高于KAI1阴性者，认为KAI1基因的高表达是某些低转移潜能肺癌的特征，KAI1基因表达可作为评估NSCLC患者预后的指标。清金得生片为我院周岱翰首席教授所创制，针对肺癌“痰、热、毒、虚”病机，经过改良而组方，方由西洋参、绞股蓝、麦冬、蟾酥、山慈菇等中药组成，具有益气除痰、清肺解毒、扶正消积的功效。广州中医药大学第一附属医院肿瘤研究所戴氏等对清金得生片进行多项实验研究，发现清金得生片有调节免疫细胞因子IL-2、TNF 的作用[11]；能使荷瘤小鼠外周血T淋巴细胞（T）、辅助性T细胞（Th）的百分数提高，纠正Th/Ts的比值异常，拮抗化疗药FT-207对免疫细胞的抑制作用，提高自然杀伤细胞的活性，能使受抑制的免疫功能提高，从而达到抑制肿瘤生长、阻止癌细胞扩散的目的[12]；清金得生片的抗肿瘤机制可能与其能抑制LAC增殖、诱导细胞凋亡作用和抑制人肺腺癌细胞端粒酶活性、调节bcl-2和bax蛋白的表达有关；本实验发现，KAI1基因在肿瘤组织中的表达显著低于正常肺组织及癌旁组织，清金得生片能上调肿瘤组织及癌旁组织中KAI1基因的表达量，从而可能抑制肿瘤的转移，这一结果可能是清金得生片抗肿瘤的作用机理之一。◆
参考文献
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